特拉华州立大学 OSCAR 影像中心副主任
Moore 先生，能告诉我们您在显微镜领域的科学背景和经验吗？
大学刚毕业，我在当地 Playtex 产品质量控制实验室（特拉华州多佛）找到了一份工作，主要职责是测量防晒乳液的 pH 值。 最终，我意识到这并不是我真正想做的事情。我申请了特拉华州立大学 (DSU) 生物系助理职位，这是一所美国传统黑人大学 (HBCU)。 我受聘为专业和非专业本科生准备基础生物学和生态学实验室。 我在这个职位上工作了 12 年。 在 DSU 期间，在夏季的几个月里，我加入了一个显微镜实验室，研究单分子和荧光成像。 在实验室做研究的那个夏天激起了我对显微镜的兴趣。2012 年，我在特拉华大学特拉华生物技术研究所 (DBI) 的生物影像中心开始了我的显微镜职业生涯。 我负责共聚焦显微镜的培训和监督使用。 5 年后，我于 2017 年离开了 DBI 生物成像核心部门，开始了 OSCAR 影像中心经理的职业生涯。自 2023 年 7 月以来，我一直担任该中心的副主任。
X-Light V3 转盘共聚焦植物采集部分。
在特定处理后跟踪叶绿素降解或扩增的马唐 (Fonio) 成像。10 倍物镜，Z 堆栈蒙太奇。
您目前在 OSCAR 中心的职务以及您感兴趣的科学领域是什么？
在担任 OSCAR 影像中心经理 5 年后，我目前担任副主任。我的主要兴趣领域是运行核心设施，并协助用户和研究人员收集尽可能最好的数据。我的责任是培训和监督学生和研究人员使用我们的各种仪器。我还负责所有显微镜的维护和修理。
此外，我的研究兴趣是了解显微镜和光谱学领域的最新技术。我个人感兴趣的是使用荧光 (FCS)、SHG 成像和光谱学来表征分子在细胞系统和细胞膜上的运动，以及使用新型成像/光谱技术来表征环境和生物样品中的微塑料。
在 OSCAR 影像中心，我们将已知的成像方法（例如宽场、共焦）与新模式结合在一起，包括纳米红外原子力显微镜 (NanoIR AFM) 和拉曼共焦。 我们还对旋转磁盘和超分辨率显微镜感兴趣；为此，我们安装了 CrestOptics 的 X-Light V3 转盘和 DeepSIM 独立系统。
您能告诉我们 OSCAR 科学界可以使用哪些仪器吗？
我们中心为 DSU 的整个研究界提供服务。其中包括 40 多个不同的实验室小组，其中包括不同的研究生和本科生群体。我们还为 7 个行业合作伙伴和外部用户提供服务。我们提供共焦、超分辨率、电子和原子力显微镜、拉曼共焦显微镜和一系列基于光谱学的仪器。
“CrestOptics 系统的主要优势是速度、灵敏度、易用性和灵活性” Moore 先生和博士生 Tiffany Bamfo（特拉华州立大学哈林顿实验室）正在使用 X-Light V3 转盘对脊髓性肌萎缩症 (SMA) 细胞进行钙成像。
Moore 先生和博士生 Tiffany Bamfo（特拉华州立大学哈林顿实验室）正在使用 X-Light V3 转盘对脊髓性肌萎缩症 (SMA) 细胞进行钙成像。
OSCAR 提供各种高端成像系统。在您看来，CrestOptics 系统的主要优势是什么？
X-Light V3 和 DeepSIM 系统几乎可以满足我们用户群的所有共焦和超分辨率应用。升级和更换相机的能力是一个明显优势，它并没有将仪器锁定到特定的相机制造商或类型。针对特定应用定制磁盘盒的灵活性，以及因密封磁盘盒设计而改变磁盘模式的能力，是竞争系统所不具备的显著优势。CrestOptics 产品是收集和评估复杂生物过程的非常经济有效的方法。此外，几乎可以安装在任何显微镜支架上，包括立式系统，使得这些仪器非常灵活。最后，CrestOptics 系统可以与多个软件一起使用，这对于成像设备的灵活性非常重要
现场答疑
“这样的设置描述清楚地表明，灵活性和兼容性是我们决定购买 CrestOptics 转盘共聚焦的驱动因素”
您的 CrestOptics X-Light V3 成像设置是什么样的？X-Light V3 转盘的哪些功能对您的研究最有帮助？
我们将 X-Light V3 安装在 IX83 机身 (Olympus) 的侧面端口上。我们目前使用两台 ORCA Fusion 2 相机 (Hamamatsu)、一个 6 线 LDI 激光系统 (89 North)、和带有压电插件的 Ludl 平台。此外，该系统还配备了 RapOptics 和 Visitron 控制器，用于带有 405 激光器的 FRAP。所有设备均由 Visiview 软件驱动。
我们目前的设置可以进行快速蒙太奇/z 堆栈项目，只需几分钟，而在点扫描共焦上通常需要几小时。实时捕获钙信号的能力有助于精确定位使用点扫描共焦无法解决的细胞事件。转盘的省时性提高了生产率。
显微镜装置位于应用研究光学科学中心/OSCAR（特拉华州立大学）。感谢我们的经销商 Voxyl Microscopes。
DeepSIM 超分辨率系统主要用于哪些应用，有哪些优势？
DeepSIM 将用于许多需要提高分辨率的项目，而我们通常会将这些项目外包给 DBI 生物成像核心。我们目前有几个项目需要接近 100 nm 的分辨率，DeepSIM 将用于这些项目。 例如，DeepSIM 用于秀丽隐杆线虫研究、神经元/星形胶质细胞突触相互作用、以及帕金森病小鼠脑切片中的脑共定位。
现场答疑
总的来说，您在 CrestOptics 系统上进行的所有生物学应用都有哪些？
我们目前使用 CrestOptics 系统进行的生物学应用包括秀丽隐杆线虫神经元分布实验、果蝇全脑成像、脊髓性肌萎缩症 (SMA) 中的钙成像、混合培养中的星形胶质细胞和神经元相互作用。此外，全鼠脑蒙太奇有助于帕金森病等神经元疾病的研究，而细胞器追踪则与阿尔茨海默病小鼠细胞模型相关。
在我看来，X-Light V3 和 DeepSIM 独立系统在核心设施中最有意义。这两个独立系统的性能都非常出色，用户的反馈也非常积极。独立系统允许一个用户使用 DeepSIM，同时另一个用户可以使用 X-Light V3，而不会互相干扰。
X-Light V3 转盘共聚焦双摄像头活细胞成像。
用钙传感器 GCamp6F（红色通道）感染的鸡星形胶质细胞。加入谷氨酸盐会引起钙的升高（绿色通道）。使用 20X 0.8 N.A，以每秒 15 帧的速度成像。物镜油，UPLanSApo。致谢：特拉华州立大学 Tempburni 实验室
在您看来，荧光显微镜和成像的未来是什么样子的？
我们认为使用机器学习和机器视觉的能力将有助于定位和分析样本，以更好地帮助核心设施的研究人员和技术人员。由于荧光团的离散信号，可以将自动查找细胞或样品中感兴趣区域的能力集成到荧光系统中。将光谱分析耦合到超分辨率系统中，可以在相关能力中添加背景细节。
